每一個(gè)實(shí)驗(yàn)新手們剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室操作細(xì)胞，都是緊張興奮又手忙腳亂，就從最基本的養(yǎng)細(xì)胞來說，大家剛開始一定覺得理論知識(shí)看起來很容易，但是，在實(shí)際情況中一般是這樣的——“到底怎么回事，細(xì)胞長(zhǎng)不好/細(xì)胞又死了/又污染了......"

　　這時(shí)，如果有一份靠譜的細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，或許可以幫助你少走彎路，今天就為大家分享一下由我們實(shí)驗(yàn)室總結(jié)的細(xì)胞培養(yǎng)過程中的知識(shí)總結(jié)，讓你事半功倍。

　　首先，我們來看看，什么是細(xì)胞培養(yǎng)：

　　細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無菌條件下，從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長(zhǎng)和繁殖的方法。通過細(xì)胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細(xì)胞，以便于研究細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能和機(jī)制。

　　細(xì)胞真的很脆弱，就像小嬰兒一樣，需要你無微不至的關(guān)懷。

　　培養(yǎng)細(xì)胞之前，你需要做好這些準(zhǔn)備：

　　1、耗材的處理、

　　玻璃器皿的清洗，對(duì)于玻璃器皿(細(xì)胞瓶、裝營(yíng)養(yǎng)液的瓶子、小青霉素瓶等)要用洗衣粉刷干凈(注意死角)，然后沖干凈。用酸液浸泡24 h以上，之后用清水沖洗數(shù)遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。

　　2、試劑的配置

　　試劑配置，細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意pH值的調(diào)節(jié)。

　　3、無菌檢驗(yàn)

　　無菌檢驗(yàn)，主要采用過濾除菌：如胰酶、抗生素、G-418溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌：如PBS、D-Hank's等。

　　不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的要求是不同的，要根據(jù)自己的細(xì)胞要求使用。

　　細(xì)胞培養(yǎng)中最重要的步驟——無菌操作

　　實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，超凈臺(tái)以紫外燈照射30分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面，并開啟超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。

　　每次操作只處理一株細(xì)胞株，避免細(xì)胞間交叉污染。

　　實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，再次以70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面。實(shí)驗(yàn)用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域，一般不要再邊緣區(qū)域操作。

　　細(xì)胞培養(yǎng)后期——定期觀察

　　你最好做到每天都去探望探望它們，看看他們的成長(zhǎng)情況

　　1、檢查培養(yǎng)液顏色與透明度的變化，顏色變黃，說明PH值下降;變紅或紫紅色，說明PH值上升，細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、死亡，一般生長(zhǎng)穩(wěn)定的細(xì)胞2-3天換液一次，生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞可3-4天換液一次。

　　2、觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底的80%，應(yīng)及時(shí)傳代。

　　3、觀察細(xì)胞形態(tài)變化，細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng)、輪廓清晰為佳。

　　4、注意微生物污染，常常出現(xiàn)培養(yǎng)液混濁，液體內(nèi)漂菌絲或細(xì)胞菌，不僅僅指微生物，包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物及細(xì)胞。

　　細(xì)胞培養(yǎng)之——污染篩查

　　你培養(yǎng)的細(xì)胞被污染了，無非是下面幾個(gè)污染途徑：

　　1、空氣是微生物傳播的最主要途徑，操作時(shí)盡量避免說話、咳嗽、打噴嚏;

　　2、使用的培養(yǎng)器械及器皿清洗消毒不干凈;

　　3、培養(yǎng)兩種以上細(xì)胞時(shí)，操作不規(guī)范，可能導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染;

　　4、血清有問題，可能血清在生產(chǎn)時(shí)就已經(jīng)被支原體或病毒污染;

　　5、原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來源于組織樣本。