干細胞凍存液是用于在低溫環境中保存干細胞活性與功能的重要溶液,其關鍵成分對維持干細胞的完整性和活性至關重要。以下是干細胞凍存液中常見的關鍵成分及其作用:
1. 二甲基亞砜(DMSO)
DMSO 是一種常用的滲透性冷凍保護劑。它能夠穿透細胞膜,通過與水分子形成氫鍵,干擾冰晶的形成,從而減少冰晶對細胞膜的損傷。此外,DMSO 還可以降低細胞內外的滲透壓差,防止細胞在冷凍過程中因水分外滲而過度脫水皺縮。在臨床和實驗室中,DMSO 的濃度通常控制在 5% - 10% 之間,以平衡其保護效果和細胞毒性。
2. 胎牛血清(FBS)
胎牛血清富含蛋白質、生長因子和營養成分,能夠為干細胞提供豐富的營養支持。在凍存過程中,FBS 可以保護細胞膜,減少細胞因冷凍而受到的機械損傷,同時也有助于維持細胞的代謝平衡。通常,FBS 在凍存液中的濃度為 10% - 20%。
3. 葡萄糖
葡萄糖是細胞的主要能量來源之一。在凍存液中添加葡萄糖,可以幫助細胞在冷凍過程中維持一定的代謝活性,為細胞在復蘇后快速恢復活力提供能量支持。
4. 非滲透性保護劑
一些凍存液中還會添加非滲透性保護劑,如蔗糖、甘油等。這些成分不能穿透細胞膜,但可以在細胞外形成高滲環境,促使細胞內的水分向外滲透,從而減少細胞內的冰晶形成。例如,一種不含 DMSO 的凍存液配方中包含蔗糖、甘油和異亮氨酸,這種組合在某些研究中顯示出與傳統含 DMSO 的凍存液相當的效果。
5. 其他添加劑
一些特殊的凍存液配方中還會加入其他成分以增強保護效果。例如,淀粉(HES)被證明在胚胎干細胞的凍存中可以作為有效的添加劑,有助于提高細胞的存活率。此外,某些研究還嘗試添加 caspase 抑制劑(如 zVAD-fmk)來減少細胞在冷凍和解凍過程中因凋亡而受到的損傷。
這些關鍵成分通過協同作用,為干細胞在低溫環境中的保存提供了全面的保護。它們不僅能夠減少冰晶對細胞的物理損傷,還能維持細胞的代謝平衡和膜完整性,從而確保干細胞在長時間低溫保存后仍能保持其活性和功能。